四种不同尤文肉瘤树突状细胞免疫疫苗的体内外抗肿瘤免疫应答研究

　　Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｎ ａ 源自文库 ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｉ ｔ ｉ ｃ ｃ ｅ ｌ ｌ － ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ －

　　中的效果 。方 法： 从健康供者 体中分离和培养外周血 单核细胞 ， 利 用粒一 巨噬细胞 集落刺激 因子 （ ￣ａ ｎ ｌ ｕ ｏ ｃ ｔ ｙ ｅ — ｍ ａ ｃ ｒ ｏ －

　　ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ — ｓ ｔ ｉ ｍｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ，Ｇ Ｍ— Ｃ Ｓ Ｆ ） 和 白细胞介素 （ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ － ４ ， Ｉ Ｌ ４） 将单 核细胞诱 生为 Ｄ Ｃ ， 并对其表 型进行

　　四种不 同尤文 肉瘤树突状细 胞免疫疫 苗的 体 内外抗肿瘤免疫应答研究

　　１ ０ ０ ０ ４ ４） （ 北京大学人 民医院骨 与软组织肿瘤 诊疗中心 ， 北京 ［ 摘

　　要］ 目的： 制备 ４种尤文 肉瘤 树突状细胞 （ ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｉ ｔ ｉ ｃ ｃ ｅ ｌ ｌ ， Ｄ Ｃ） 疫苗 ， 并 比较和分析其在体 内外抗肿瘤免疫反应

　　生长的体 内实验 中， 融合 瘤组 小 鼠肿瘤最 小 ， Ｅ Ｗ Ｓ ／ Ｆ Ｌ Ｉ １ 修 饰组 、 肿 瘤裂 解物负 载组 和未 作处理 组之 间差 别不 大。

　　结论 ： 尤 文肉瘤 Ｄ Ｃ疫 苗可 以诱 导有效的抗肿瘤免疫 反应 ， 将各 种尤文 肉瘤 Ｄ Ｃ疫 苗进行 体 内外 综合 比较时 发现 ， 融合瘤是最佳 的尤文 肉瘤 免疫 疫苗 。 ［ 关键词 ］树 突细胞 ；肉瘤 ， Ｅ ｗ ｉ ｎ ｇ ；免疫疗法 ［ 中图分类号 ］Ｒ ７ ３ ０ ． ２ ６ ２ ［ 文献标识 码］Ａ ［ 文章 编号 ］１ ６ ７ １ — １ ６ ７ Ｘ（ ２ ０ ０ ７ ） ０ ４ － ０ ４ ０ ３ － ０ ６

　　诱 生出的 Ｃ Ｄ ８ ３ 、 Ｃ Ｄ ８ ０ 、 Ｃ Ｄ ８ ６及 ＨＬ Ａ — Ｄ Ｒ高表达 的成熟 Ｄ Ｃ 。Ｄ Ｃ ｓ ／ Ａ ６ ７ ３融合细胞 的电融 合效率达到 １ ６ ． ３ ２ ％。各种 Ｄ Ｃ疫苗都可 以诱导 出有 效的抗肿瘤免疫反应 ， Ｉ Ｆ Ｎ 一 － ｙ 分泌检测显示 ， 融合 瘤组 较其他 Ｄ Ｃ疫苗组 产生 Ｃ Ｔ Ｌ水平 高 ， 其后依次为肿瘤裂解物负载组 、 Ｅ ＷＳ ／ Ｆ Ｌ Ｉ １ 修 饰组 和未作处 理组 。而 在体外 杀伤 Ａ ６ ７ ３实验 中， 融合瘤 组杀 伤效率 最高 ， 肿瘤 裂解 物负载组 次之 ， Ｅ Ｗ Ｓ ／ Ｆ Ｌ Ｉ １修饰组 与未作处 理组最 低 ， 且后两 组间差异 无统计 学 意义。在抑 制肿瘤

　　ｇ ｉ ｅ ｓ ｆ ｏｒ Ｅｗｉ ｎｇ ｓ ａ ｒ ｃ ｏ ｍ ａ：ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ａ ｎｄ ｉ ｎ ｖ ｉ ｖ ｏ ｉ ｎ ｄｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ＳＣＩ Ｄ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｓ

　　Ｚ Ｈ Ａ Ｏ Ｈ ｕ ｉ ， Ｔ Ａ Ｎ Ｇ Ｓ ｈ ｕ ｎ ， Ｑ Ｕ Ｈ ｕ — ｙ ｉ ， Ｇ Ｕ Ｏ Ｗｅ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｘ ｉ ａ ｏ ，Ｐ Ｅ Ｎ Ｇ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ — ｌ ｉ ａ ｎ ｇ （ Ｍｕ ｓ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｋ ｅ ｌ ｅ ｔ ａ ｌ Ｔ ｕ ｍｏ ｒ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｐ ｅ ｋ ｉ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ’ ｓ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ４ ４， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）

　　流式细胞仪分析 ， 分别制备 ４种 Ｄ Ｃ疫苗 ： （ １ ） 融合瘤 ， 将Ｄ Ｃ与 Ａ ６ ７ ３细胞进行 电融合 ， 并通过 流式 细胞 仪检测荧光 双染色融合瘤 ， 以确定其融合率 ； （ ２ ） 负载肿瘤裂解物 Ｄ Ｃ， 将Ｄ Ｃ与 Ａ ６ ７ ３细胞反复冻融物共培养 ； （ ３ ） Ｅ Ｗ Ｓ ／ Ｆ Ｌ Ｉ １修 饰Ｄ Ｃ， 用 编码 Ｅ ＷＳ ／ Ｆ Ｌ Ｉ １的腺病 毒转 染 Ｄ Ｃ ； （ ４ ） 未作处理 的成熟 的 Ｄ Ｃ 。将各种 Ｄ Ｃ疫苗与组织相容性 白细胞抗 原

　　Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ ＮＡ Ｌ Ｏ Ｆ Ｐ Ｅ Ｋ Ｉ Ｎ Ｇ Ｕ Ｎ Ｉ Ｖ Ｅ ＲＳ Ｉ Ｔ Ｙ（ Ｈ Ｅ Ａ Ｌ Ｔ Ｈ Ｓ Ｃ Ｉ Ｅ Ｎ Ｃ Ｅ Ｓ ） Ｖｏ １ ． ３ ９ Ｎ ｏ ． ４ Ａ ｕ ｇ ．２ ０ ０ ７

　　（ ｈ ｉ ｓ ｔ ｃｏ ｏ ｍ ｐ ａ ｔ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｌ ｅ ｕ ｋ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｈ Ｌ Ａ） 相 配的 Ｃ Ｄ ８ Ｔ细胞共 培养 ， 用Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂盒检测刺激增殖细胞 毒性 Ｔ淋 巴细胞（ ｃ ｙ ｔ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ Ｔ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｃ ｔｅ ｙ ， Ｃ Ｔ Ｌ ） 分泌 干扰 素（ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｏ ｎ－ ｙ ， Ｉ Ｆ Ｎ 一 － ｙ ） 的量 ， 用ｃ ｒ 细胞 杀伤试剂盒检测 Ｃ Ｔ Ｌ在 不 同比例下对 Ａ ６ ７ ３细胞 的杀伤作 用。通过腹 腔注射人外周血淋 巴细胞 （ ｐ ｅ ｒ ｉ ｐ ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｃｙ ｏ ｔｅ ， Ｐ Ｂ Ｌ ） ， 皮下 接 种 Ａ ６ ７ ３细胞 ， 构 建重建人免疫系统 的 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ鼠尤文 肉瘤模 型 ， 应用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂盒检测小 鼠外周 血中 Ｉ ｇ Ｇ的量 ， 以确 定 免疫重建效果 ， 并接种不 同的 Ｄ Ｃ疫苗 ， 检测其对小 鼠成瘤 的影 响。结果 ： 流式细胞术 检测 出从 外周血 单核细 胞